Teman-teman yang melakukan eksperimen terkait sel pasti sering menggunakan metode pembekuan sel. Singkatnya, penyimpanan beku sel adalah menyimpan sel di lingkungan bersuhu rendah untuk mencapai tujuan pengawetan jangka panjang. Sel akan memiliki tingkat mutasi tertentu selama proses transmisi. Untuk memastikan bahwa sel masih dapat digunakan dalam kasus pencemaran dan mutasi sel, beberapa sel biasanya digunakan untuk pembekuan.
Prinsip sel beku
Salah satu prinsip dalam proses pembekuan dan pemulihan sel adalah “slow frozen fusion” untuk menyimpan vitalitas sel secara maksimal. Sederhananya, perlu lambat saat membeku dan mendingin, dan perlu dipanaskan dengan cepat saat pulih dari suhu rendah. Alasan pembekuan lambat adalah jika sel ditempatkan langsung di lingkungan bersuhu sangat rendah seperti nitrogen cair, sel akan membentuk kristal es yang besar, yang akan merusak sel.
Jika Anda membekukannya secara perlahan, sel dapat mengalami dehidrasi secara perlahan untuk mencapai tujuan melindungi sel. Selain itu, saat pulih, juga untuk mencegah kristal es kecil membentuk kristal es besar, yaitu kristal es kristal yang berat. Oleh karena itu, ketika setiap orang biasanya melakukan pembekuan sel, selalu menyebabkan sel mengalami kerugian, yang kemungkinan akan berdampak pada tahap pembekuan.
Beberapa metode pembekuan sel
Metode manual: Sel beku biasanya disimpan dalam nitrogen cair. Metode pengoperasian manual adalah mendinginkan gradien di lemari es. Simpan sel dalam tabung penyimpanan beku, dan taruh di lingkungan lemari es 4 derajat C, -20 derajat C, -80 derajat C secara berurutan. Dibekukan selama 24 jam pada -80 derajat C sebelum dipindahkan ke nitrogen cair. Pendinginan manual tidak memerlukan tambahan bahan habis pakai lainnya. Hal ini dapat dioperasikan secara manual. Ini adalah yang paling sederhana, tetapi tidak sederhana. Operasi sebenarnya merepotkan. Dan efeknya tidak terlalu bagus, karena metode pendinginan ini masih belum seragam, dan belum tentu bisa diterapkan untuk sel yang lebih rapuh.
Kotak pendingin gradien : Kotak pendingin gradien yang dijual di pasaran khusus digunakan dalam pendinginan seragam dari proses pembekuan. Kecepatan pendinginan biasanya -1 derajat /menit. Masukkan tabung penyimpanan beku ke dalam kotak pendingin gradien, dan tempatkan kotak pendingin gradien langsung di lingkungan lemari es -80 derajat C untuk menghabiskan malam tanpa operasi gradien manual. Kemudian turunkan tabung penyimpanan dan masukkan ke dalam nitrogen cair. Efek penggunaan kotak pendingin gradien lebih baik, karena kotak pendingin komersial di pasaran dapat memastikan tingkat pendinginan yang seragam.
Ada dua kotak pendingin gradien umum di pasaran. Perlu menambahkan isopropil, biasanya badan kotak PC. Saat digunakan, tambahkan isopenol ke garis penskalaan di kotak saat menggunakannya. Isopropanol digunakan sebagai pembawa untuk penyimpanan dan distribusi panas.
Jenis lain tidak perlu ditambahkan dengan isopropil, berbusa, dan freezer dapat ditempatkan langsung saat digunakan, yang lebih nyaman untuk dioperasikan.
Kotak pendingin isopropanol direkomendasikan untuk mengganti cairan setelah digunakan beberapa kali, tetapi karena isopropanol adalah cairan berbahaya yang menyebabkan kerusakan pada percobaan dan lingkungan, biasanya dapat digunakan beberapa kali. Namun, perlu untuk memastikan bahwa cairan itu dalam jumlah tertentu.
Penyimpanan beku tidak terprogram: Gunakan cairan beku tidak terprogram yang dapat dibeli di pasar. Dibandingkan dengan cairan beku tradisional, komponen internal dapat mengurangi kerusakan sel kristal es, sehingga tidak perlu menggunakan gradien untuk mendinginkan, juga tidak memerlukan kotak pendingin gradien. Penyimpanan beku dapat ditempatkan langsung di lingkungan lemari es -80 derajat C.
Banyak sampel sel yang sangat berharga. Selain kita, kita harus menggunakannya saat melakukan percobaan. Anda juga perlu memilih produk yang bagus sebanyak mungkin dalam pemilihan produk terkait. Pilih tabung penyimpanan beku dengan kualitas yang mumpuni, usahakan menggunakan alat pendingin gradien untuk pembekuan, dan maksimalkan jaminan kerusakan sel yang rendah untuk menghindari kerugian kecil karena minor.