Pengetahuan mikroba yang Anda inginkan
Mikroorganisme adalah sekelompok organisme kecil yang ada secara luas di alam dan tidak terlihat oleh mata telanjang dan harus diperbesar ratusan, ribuan atau bahkan puluhan ribu kali dengan bantuan mikroskop optik atau mikroskop elektron. Mereka memiliki keunggulan ukuran kecil, struktur sederhana, reproduksi cepat, variasi mudah dan kemampuan kuat untuk beradaptasi dengan lingkungan.
Klasifikasi mikroorganisme:
Ada banyak jenis mikroorganisme, setidaknya lebih dari 100,000 jenis. Menurut strukturnya, komposisi kimiawi dan kebiasaan hidup serta perbedaan lainnya dapat dibagi menjadi tiga kategori.
Inti sel mikroba eukariotik memiliki tingkat diferensiasi yang lebih tinggi, termasuk membran inti, nukleolus dan kromosom; sitoplasma memiliki organel lengkap (seperti retikulum endoplasma, ribosom dan mitokondria, dll). Jamur termasuk jenis mikroorganisme ini.
Sel mikroba prokariotik memiliki tingkat diferensiasi inti yang rendah, hanya nukleoplasma primitif, tidak memiliki membran inti dan nukleolus; organelnya tidak terlalu lengkap. Ada banyak spesies mikroorganisme tersebut, termasuk bakteri, spirochetes, mycoplasma, rickettsia, chlamydia dan actinomycetes.
Mikroorganisme aseluler tidak memiliki struktur sel yang khas dan tidak memiliki sistem enzim untuk menghasilkan energi, dan hanya dapat tumbuh dan bereproduksi dalam sel hidup. Virus termasuk jenis mikroorganisme ini.
Pemisahan dan pemurnian mikroorganisme
Kultur mikroba yang mengandung lebih dari satu spesies disebut kultur campuran. Jika semua sel dalam suatu koloni berasal dari satu sel induk, maka koloni tersebut disebut biakan murni. Dalam identifikasi spesies bakteri, mikroorganisme yang digunakan pada umumnya diharuskan berupa biakan murni. Proses memperoleh kultur murni disebut pemisahan dan pemurnian, dan ada banyak metode.
1. Metode piring tuang
Pertama, suspensi mikroba diencerkan secara seri, dan sejumlah pengenceran dicampur sepenuhnya dengan media agar nutrisi terlarut yang dipertahankan pada sekitar 40-50 derajat , dan kemudian campuran tersebut dituangkan ke dalam cawan petri steril. Setelah pemadatan, pelat diinkubasi terbalik dalam ruang konstan. Satu sel diperbanyak untuk membentuk koloni, satu koloni diambil untuk dibuat suspensi, dan langkah di atas diulang beberapa kali untuk mendapatkan biakan murni.
2. Metode pelapisan pelat datar
Pertama, suspensi mikroba diencerkan dengan benar, dan sejumlah pengenceran ditempatkan pada piring agar nutrisi steril yang telah mengeras, kemudian pengenceran tersebut disebarkan secara merata di permukaan media dengan spatula kaca steril. Koloni tunggal dapat diperoleh dengan inkubasi pada suhu konstan.
3. Metode penulisan pelat
Cara termudah untuk mengisolasi mikroorganisme adalah dengan menggores. Coretkan sedikit biakan pada piring menggunakan ose steril. Ada banyak metode penulisan. Metode penggoresan umum yang lebih cenderung menampilkan koloni tunggal adalah metode garis miring, metode kurva, metode kuadrat, metode radiasi, dan metode empat kisi. Ketika loop inokulasi bergerak mundur pada permukaan media, cairan bakteri pada loop inokulasi secara bertahap diencerkan, dan akhirnya satu sel tersebar di garis yang ditarik. Setelah kultur, setiap sel tumbuh menjadi koloni.
4. Metode budaya pengayaan
Metode dan prinsip metode budaya pengayaan sangat sederhana. Kita dapat menciptakan kondisi yang memungkinkan hanya mikroba yang diinginkan untuk tumbuh, dan dalam kondisi ini mikroba yang diinginkan dapat bersaing secara efektif dengan mikroba lain dan jauh melebihi mikroba lain dalam hal kemampuan tumbuh. Jika beberapa parasit obligat ingin diisolasi, sampel harus diinokulasi ke dalam populasi sel inang rentan yang sesuai untuk tumbuh dalam jumlah besar. Bakteri parasit murni dapat diperoleh dengan penyemaian berulang.
5. Metode anaerobik
Di laboratorium, untuk mengisolasi beberapa bakteri anaerob, tabung reaksi yang berisi media asli dapat digunakan sebagai bejana kultur, dan tabung reaksi dapat dipanaskan dalam penangas air mendidih selama beberapa menit untuk mengeluarkan oksigen terlarut dalam media. . Kemudian didinginkan dengan cepat dan diinokulasi. Setelah inokulasi, parafin steril ditambahkan ke permukaan media untuk mengisolasi media dari udara. Cara lain adalah mengganti gas dalam media dengan N2 atau CO2 setelah inokulasi, dan kemudian menutup mulut tabung reaksi di atas nyala api. Kadang-kadang untuk mengisolasi beberapa bakteri anaerob lebih efisien, sampel yang diisolasi dapat diinokulasi pada media, dan kemudian cawan petri dapat ditempatkan dalam perangkat kultur anaerob yang tertutup rapat.
6. Metode isolasi sel tunggal (atau spora tunggal).
Ini adalah mengambil metode pemisahan mikro untuk secara langsung mengisolasi sel tunggal atau individu tunggal dari populasi campuran untuk kultur untuk mendapatkan kultur murni. Untuk mikroorganisme yang lebih besar, satu individu dapat diekstraksi menggunakan kapiler. Untuk mikroorganisme dengan individu yang relatif kecil, mikromanipulator diperlukan untuk mengambil sel mikroba tunggal atau spora dengan kapiler atau microneedle, hook, loop, dll di bawah mikroskop untuk mendapatkan biakan murni. Metode pemisahan sel tunggal memiliki persyaratan yang relatif tinggi pada teknologi operasi.
Kultur mikroba
1. Menurut apakah oksigen diperlukan selama kultur, dapat dibagi menjadi dua kategori: kultur aerobik dan kultur anaerobik.
Budaya aerobik: juga dikenal sebagai "budaya aerobik". Artinya, ketika mikroorganisme ini dibudidayakan, perlu ditambahkan oksigen, jika tidak maka tidak akan tumbuh dengan baik. Di laboratorium, biakan miring diperoleh dengan memperoleh udara steril dari luar melalui sumbat kapas. Sebagian besar biakan cair dalam labu Erlenmeyer dikocok dengan shaker, sehingga udara luar dapat terus masuk ke dalam botol.
Kultur anaerobik: Juga dikenal sebagai "kultur anaerobik". Mikroorganisme semacam itu tidak membutuhkan oksigen untuk berpartisipasi dalam budidaya. Dalam proses kultivasi mikroorganisme anaerobik, hal yang paling penting adalah menghilangkan oksigen dalam medium.
2. Menurut keadaan fisik mediumnya, dapat dibagi menjadi dua kategori: kultur padat dan kultur cair.
Kultur padat: Ini adalah metode menginokulasi strain ke dalam media padat yang longgar dan kaya nutrisi, dan membudidayakan mikroorganisme dalam kondisi yang sesuai.
Kultur cair: Dalam percobaan, kultur cair dapat membuat mikroorganisme berkembang biak dengan cepat dan memperoleh kultur dalam jumlah besar. Dalam kondisi tertentu, ini juga merupakan metode yang efektif bagi mikroorganisme untuk memilih dan memperkaya bakteri.
Biotek BKMAM menyediakan bahan habis pakai laboratorium yang sesuai untuk kultur mikroba:
Cawan petri bulat/persegi plastik sekali pakai:
l Bahan polystyrene transparansi tinggi (PS);
lPermukaannya halus dan rata, dan tidak ada distorsi optik sel di bawah pengamatan mikroskop;
l Desain susun membuat penumpukan dan penyimpanan lebih mudah;
l Sterilisasi etilen oksida (EO);
l Ketahanan aus dan korosi.
Tongkat/loop inokulasi plastik sekali pakai:
Bahan polistiren (PS);
Anti-polusi, Endotoksin, DNase, RNase, dan bebas pirogen;
Kemasan independen telah disterilkan;
Pengerjaan halus dan spesifikasi lengkap;
Penyebar sel plastik sekali pakai, penyebar bakteri:
Bahan polistiren (PS);
Anti-polusi, Endotoksin, DNase, RNase, dan bebas pirogen;
Desain berbentuk L, mudah digunakan;
Sekali pakai, ringan dan nyaman.
Pelat Spesifikasi Stainless Steel / Sekali Pakai Steril:
Pelat spesifikasi baja tahan karat terbuat dari baja tahan karat, dan pelat spesifikasi sekali pakai terbuat dari polypropylene (PP) food grade.
Anti-polusi, Endotoksin, DNase, RNase, dan bebas pirogen;
Area pengolesan distandarisasi secara ketat
Satu sisi pelat spesifikasi dilengkapi dengan pegangan yang mudah dioperasikan
Paket tunggal tertutup steril untuk menghindari kontaminasi sekunder pada pengambilan sampel dan kesalahan dalam hasil
Sekali pakai untuk menghindari kontaminasi silang dan mengurangi beban kerja
Selamat datang untuk bekerja sama dengan kami
Sungguh-sungguh
Michael Peng
michael@bkmbio.com