Kondisi Dasar untuk Kultur Sel
1. Media kultur sel yang sesuai
Media kultur sel yang sesuai adalah salah satu kondisi terpenting untuk pertumbuhan dan proliferasi sel secara in vitro. Media kultur tidak hanya menyediakan nutrisi sel dan zat dasar untuk mendorong pertumbuhan dan proliferasi sel, tetapi juga menyediakan lingkungan hidup untuk pertumbuhan dan reproduksi sel yang dikultur.
2. Serum berkualitas tinggi
Saat ini, sebagian besar media sintetik memerlukan penambahan serum. Serum merupakan salah satu komponen terpenting dalam media kultur sel, mengandung berbagai faktor pertumbuhan dan nutrisi lain yang dibutuhkan untuk pertumbuhan sel.
3. Suhu pertumbuhan sel konstan
Untuk mempertahankan pertumbuhan sel kultur yang kuat, harus ada suhu yang konstan dan sesuai.
4. Lingkungan gas yang sesuai
Gas adalah salah satu kondisi yang diperlukan untuk kelangsungan hidup sel mamalia, dan gas yang dibutuhkan terutama oksigen dan karbon dioksida.
5. Suhu Kultur Sel
Untuk mempertahankan pertumbuhan sel yang kuat, harus ada suhu yang konstan dan sesuai. Berbagai jenis sel memiliki persyaratan yang berbeda untuk suhu kultur. Suhu standar untuk kultur sel manusia adalah 36,5 derajat ± 0.5 derajat . Penyimpangan dari kisaran suhu ini akan mempengaruhi metabolisme normal sel dan bahkan mati.
6. Lingkungan gas yang sesuai
Gas adalah salah satu kondisi yang diperlukan untuk kelangsungan hidup kultur sel mamalia, dan gas yang dibutuhkan terutama oksigen dan karbon dioksida. Oksigen berpartisipasi dalam siklus asam trikarboksilat, menghasilkan energi untuk pertumbuhan dan proliferasi sel dan mensintesis berbagai komponen yang dibutuhkan untuk pertumbuhan sel.
Kontaminasi umum dari kultur sel
1. Kontaminasi bakteri
Kontaminasi bakteri adalah yang paling umum. Setelah operasi sedikit tidak tepat, itu akan menyebabkan kontaminasi sel. Setelah kontaminasi bakteri, itu akan muncul sebagai strip hitam tipis pasir ketika diamati di bawah mikroskop. Berbentuk batang, dll. Kedua, media kultur berubah menjadi kuning dan keruh, dan sedimen berbentuk pasir halus dapat terlihat jelas di cawan petri, dan ada bau aneh dari waktu ke waktu.
2. Kontaminasi jamur
Larutan kultur yang terkontaminasi jamur bening dan transparan, tidak seperti wabah besar infeksi bakteri, sehingga sulit untuk mendeteksinya secara dini. Terkadang terlihat seperti filamen di bawah mikroskop, terkadang terlihat seperti karang, dan perlahan filamen hitam yang sangat tipis akan tumbuh. Ini Ketika sudah terlambat, sulit bagi sel untuk diselamatkan.
3. Kontaminasi jamur
Konsisten dengan infeksi jamur, karena media kulturnya bening, kontaminasi jamur sulit dideteksi secara dini, padahal seringkali terlambat. Kotoran flokulan perlahan muncul di media kultur, dan benda-benda mengambang massa berfilamen dapat dilihat di bawah mikroskop, seperti catkin di angin. Sel masih bisa tumbuh, tetapi seiring waktu, sel memburuk dan berhenti tumbuh.
4. Infeksi mikoplasma
Media kultur menjadi keruh. Setelah mikoplasma menginfeksi sel, perubahan sitopatik tidak terlihat jelas, tetapi keadaan sel menjadi lebih buruk dan pertumbuhan melambat. Mungkin ada bintik hitam kecil di bawah mikroskop, tetapi media kultur umumnya tidak keruh. Setelah sel dilewati, bintik hitam antar sel muncul, sel bervakuola, dan banyak sel menyerupai apoptosis dan nekrosis. Akhirnya, sel-sel itu mengapung dan mati sepenuhnya.
Pencegahan kontaminasi sel
Menetapkan aturan dan regulasi yang baik dapat sangat membantu dalam mengurangi kontaminasi sel. Termasuk sistem akses, norma operasi dan sistem manajemen harian.
Sistem akses: termasuk personel dan material. Personil perlu dilatih sebelum dapat beroperasi sendiri, dan mereka harus memenuhi persyaratan pemakaian sebelum memasuki laboratorium, seperti jas putih, baju isolasi, masker, sarung tangan, dll. disterilkan dan disterilkan, dan barang yang dibeli perlu dibeli dari saluran reguler dan andal. Sel yang baru dibeli harus diuji dan diverifikasi sebelum digunakan.
Spesifikasi pengoperasian: Yang terbaik adalah merumuskan spesifikasi untuk operasi rutin, dan personel laboratorium harus mengikuti spesifikasi pengoperasian, yang tidak dapat diubah sesuka hati, dan juga memupuk kebiasaan pengoperasian yang baik bagi personel laboratorium. Misalnya, setelah ujung pipet disedot, itu tidak akan diperpanjang ke dalam media untuk kedua kalinya, dan jumlah media yang cukup akan dihisap sekali. Saat menambahkan cairan, cairan harus ditambahkan dalam suspensi sebanyak mungkin, yang secara efektif dapat mencegah kontaminasi mikoplasma dan kontaminasi silang sel. Selain itu, jika memungkinkan, hanya mengoperasikan satu baris sel pada satu waktu, dan lebih baik memiliki sedikit interval waktu antar sel untuk menghindari kontaminasi silang.
Sistem manajemen harian: Ini mencakup aturan dan metode untuk penggunaan, pembersihan, dan pemeliharaan lingkungan dan bahan habis pakai, reagen, dll. Ada juga manajemen konsumsi, inventaris dan pengadaan reagen dan bahan habis pakai, termasuk manajemen inventaris dua tingkat sampel sel. Untuk sumber kontaminasi yang tidak mudah ditemukan, sebaiknya dilakukan pengujian secara berkala, terutama kontaminasi mikoplasma dan kontaminasi silang sel.
BKMAM Bio menyediakan bahan habis pakai yang sesuai untuk kultur sel:
Cawan petri plastik sekali pakai bulat/persegi:
Bahan polystyrene transparansi tinggi (PS);
Permukaannya halus dan rata, dan tidak ada distorsi optik sel di bawah pengamatan mikroskop;
Desain susun membuat penumpukan dan penyimpanan lebih mudah;
Sterilisasi etilen oksida (EO);
Keausan dan ketahanan korosi.
Perawatan yang patuh dari piring kultur sel:
Bahan polistirena (PS);
Sterilisasi berkas elektron, tanpa pirogen, tanpa toksin;
Perawatan permukaan plasma vakum, adhesi sel yang sangat baik;
Permukaannya halus dan rata, dan tidak ada distorsi optik sel di bawah pengamatan mikroskop;
Desain yang dapat ditumpuk membuat penumpukan dan penyimpanan menjadi lebih mudah.
Pelat kultur sel plastik:
Bahan polistirena (PS);
Cocok untuk kultur sel normal, jenis pelat perawatan yang tidak patuh;
Tidak ada pirogen, tidak ada racun, disterilkan;
Kemasan independen tipe sobek yang mudah, mudah dioperasikan;
Perlakuan patuh pada pelat kultur sel:
Bahan polistirena (PS);
Jenis pelat pengobatan yang patuh (pengobatan TC), cocok untuk kultur sel yang melekat;
Tidak ada pirogen, tidak ada racun, disterilkan;
Kemasan independen tipe sobek yang mudah, mudah dioperasikan;
Semua adalah dasar datar.
Perawatan yang patuh dari labu kultur sel:
Bahan polistirena (PS);
Sterilisasi berkas elektron, tanpa pirogen, tanpa toksin;
Perawatan permukaan plasma vakum, adhesi sel yang sangat baik;
Penutup bernapas, yang kondusif untuk pertukaran gas dan mencegah mikroorganisme melewatinya.
Cryovial spin internal/eksternal:
100 persen bahan polypropylene murni (PP);
Dapat menahan 15psi, 121 derajat sterilisasi;
Dinding tabung menebal, dan badan tabung memiliki skala dan area penulisan;
Ada segel cincin silikon antara ulir penutup pipa dan badan pipa untuk memastikan kekencangan;
Tidak ada DNase, tidak ada RNase, tidak ada pirogen, tidak ada endotoksin.
