ELISA dengan hasil yang buruk?Ikuti kami untuk memilih piring Elisa yang benar.
Memilih pelat ELISA yang sesuai adalah langkah pertama menuju eksperimen ELISA yang sukses, tetapi banyak orang mengabaikannya. Ketika orang melakukan eksperimen, mereka sering hanya mempertimbangkan eksperimen itu sendiri, tetapi tidak tahu bahwa produk sering kali memiliki dampak besar pada eksperimen. Pemilihan produk yang tepat akan berkontribusi pada keberhasilan percobaan. Kami biasanya mempertimbangkan faktor-faktor berikut saat melakukan eksperimen ELISA:
1. Bentuk bagian bawah
Saat ini, pabrikan mendesain sumur berlabel enzim sebagai kolom independen, dan secara tepat meningkatkan jarak antar sumur sehingga dapat dipisahkan secara independen, sehingga meminimalkan kontaminasi silang. Berbagai jenis piring Elisa memiliki bentuk dasar sumur yang berbeda. Berikut adalah beberapa bentuk dasar lubang yang umum:
Dasar datar: Bagian bawah horizontal, juga disebut dasar F. Cahaya tidak akan dibelokkan melalui bagian bawah, yang dapat mentransmisikan cahaya secara maksimal. Gunakan untuk eksperimen yang memerlukan dasar bulat untuk visibilitas atau alasan lainnya.
Round Bottom: Juga dikenal sebagai U-bottom, memberikan hasil pembersihan terbaik dan kinerja hybrid, cocok untuk aplikasi yang perlu menguji sedimen.
C-bottom: Ini dapat memberikan efek pembersihan yang baik antara bagian bawah yang rata dan bagian bawah yang bundar, sambil menggabungkan keuntungan dari bagian bawah yang rata.
Cone Bottom: Juga dikenal sebagai V-bottom, sangat cocok untuk pengambilan sampel yang tepat dan penyimpanan sampel mikro untuk pemulihan volume kecil yang optimal.
2. Warna piring Elisa
Ada tiga warna piring Elisa: transparan, hitam dan putih.
Mayoritas ELISA memilih plat transparan sebagai bahan percobaan. Pelat Elisa putih dan hitam umumnya digunakan untuk deteksi pendaran. Pelat ELISA hitam itu sendiri menyerap cahaya, sehingga sinyalnya lebih lemah daripada pelat ELISA putih. Pelat Black Elisa umumnya digunakan untuk mendeteksi cahaya yang lebih kuat, seperti deteksi fluoresensi; sebaliknya, pelat Elisa putih dapat digunakan untuk deteksi cahaya yang lebih lemah, dan sering digunakan untuk chemiluminescence umum dan pengembangan warna substrat (seperti luciferase ganda). analisis gen reporter).
3. Bahan piring Elisa
Bahan umum adalah polietilen (PE), polipropilen (PP), polistirena (PS), polivinil klorida (PVC) dan polikarbonat (PC).
Bahan yang paling banyak digunakan dalam ELSIA adalah polistirena dan polivinil klorida. Papan lunak polivinil klorida tipis, dapat dipotong, dan harganya murah. Kekurangannya adalah finishingnya tidak sebaik papan polystyrene, dan dasar lubangnya tidak rata seperti polystyrene. Tetapi nilai latar belakang yang sesuai juga akan meningkat. Biasanya, perlakuan pencangkokan ion dilakukan pada permukaan pelat ELISA, dan gugus fungsi aktif seperti gugus aldehida, gugus amino, dan gugus epoksi dimasukkan ke dalam permukaan polimer untuk meningkatkan kinerja permukaan substrat.
4. mekanisme pengikatan yang berbeda
Pengikatan bahan pelapis yang efisien ke permukaan bawah pelat merupakan langkah penting dalam ELISA. Oleh karena itu, karakteristik struktural dan sifat kimia dari zat yang akan dilapisi harus dianalisis dengan cermat sebelum percobaan untuk memilih pelat Elisa yang sesuai. Secara umum, ada beberapa cara untuk mengikat bahan pelapis ke bagian bawah pelat: adsorpsi pasif, pengikatan kovalen dan penangkapan afinitas.
Adsorpsi Pasif: Mekanisme adsorpsi pasif rumit, dan pengikatan antara bahan pelapis dan bagian bawah pelat terutama bergantung pada gaya antarmolekul (gaya van der Waals) dan ikatan hidrogen. Pada sebagian besar ELISA, pengikatan zat pelapis ke bagian bawah pelat dilakukan dengan adsorpsi pasif. Umumnya, pengikatan antara antigen berat molekul sedang dan besar (atau antibodi) dan bagian bawah pelat dilakukan dengan adsorpsi pasif. Karakteristik hidrofobik/hidrofilik dari permukaan bawah pelat sering dipertimbangkan saat memilih pelat Elisa. Tabel berikut mencantumkan ruang lingkup aplikasi dan penggunaan permukaan substrat hidrofilik yang berbeda:
hidrofilik | Pengikatan prioritas | penggunaan utama |
- | Molekul yang mengandung daerah hidrofobik yang signifikan, seperti: lipid, lipoprotein, protein besar | Antigen ELISA, FlA, LIA |
plus | Biomolekul dengan sifat hidrofilik/hidrofobik seperti: protein sedang hingga besar, imunoglobulin, albumin | ELISA Sandwich Antibodi Ganda, ELISA Antigen |
plus plus | Biomolekul dengan sifat hidrofilik/hidrofobik seperti: protein kecil hingga besar, imunoglobulin, albumin, LPS, protein terfosforilasi, glikoprotein | Antibodi ganda ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glikoprotein, molekul lipid polar, fosfolipid, kardiolipid | ELISA antigen |
Penangkapan Afinitas: Penangkapan afinitas didasarkan pada pengikatan spesifik makromolekul berlabel ke reseptor yang sesuai. Makromolekul yang ditandai dapat diperoleh baik dengan kopling kimia atau dengan rekayasa genetika.
Fitur Affinity Capture adalah:
1. spesifisitas tinggi
2.Dapat meningkatkan rasio signal-to-noise dari hasil pengukuran
Permukaan dasar sumur yang lebih umum adalah: permukaan berlapis streptavidin (streptavidin); permukaan dilapisi nikel chelate (Nickel Chelate) dan permukaan dilapisi glutathione (Glutathione, GSH).
3. Permukaan streptavidin: Afinitas dan spesifisitas tinggi streptavidin dan biotin digunakan untuk mewujudkan pengikatan pelat bawah ke protein yang dilapisi.
4. Permukaan kelat nikel: Kelat nikel dilekatkan pada permukaan polimer untuk mengikat protein fusi dengan tag His (histidin).
5. Permukaan glutathione: Penggunaan spesifisitas enzim dan substrat antara glutathione dan glutathione sulfhydryltransferase (GST) untuk mencapai pengikatan pelat bawah ke protein mantel.
Mengapa memilih piring BKMAM Elisa?
Terbuat dari 100 persen bahan polystyrene,
Cocok untuk kultur sel yang patuh,
Dasar datar, bahkan ketebalan dan ukuran seragam untuk kutub reaksi,
Steril dengan paket individu,
Kualitas tinggi dengan harga pabrik.
